Thermo Scientific Varioskan Flash

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Varioskan Flash - Grundlegende Bedienung

Überblick

Der Varioskan Flash ist ein Multimode-Mikroplatten-Reader für verschiedene Detektionsmethoden (Absorbanz, Fluoreszenz, Lumineszenz, Zeit-aufgelöste Fluoreszenz). Diese Anleitung bietet einen ersten Überblick - das Handbuch bleibt unverzichtbar für detaillierte Protokolle!

Vorbereitung

1. Gerät einschalten

• Hauptschalter am Gerät betätigen
• Warten bis Initialisierung abgeschlossen (ca. 2-3 Minuten)
• Software "SkanIt" am Computer starten

2. Grundeinstellungen prüfen

• Gerät sollte aufgewärmt sein (mindestens 30 Min vor Messung)
• Temperatur kontrollieren falls temperierte Messung geplant
• Lampen-Status prüfen (Xenon/Halogen je nach Anwendung)

Probenvorbereitung

Mikroplatten

• Kompatible Platten: 96/384-Well-Platten
• Plattentyp beachten:
  • Klare Platten für Absorbanz
  • Schwarze Platten für Fluoreszenz/Lumineszenz
  • Weiße Platten für Lumineszenz (optimal)

Probenvolumen

• Minimum: ~50 μl (96-Well), ~10 μl (384-Well)
• Optimal: 100-200 μl (96-Well), 20-50 μl (384-Well)
• Luftblasen vermeiden!

Software-Bedienung (SkanIt)

1. Neues Protokoll erstellen

• "New Protocol" wählen
• Messtyp auswählen:
  • Absorbanz: für ELISA, Protein-Assays, Zytotoxizität
  • Fluoreszenz: für Live/Dead-Assays, Calcium-Imaging
  • Lumineszenz: für ATP-Assays, Reporter-Gene

2. Parameter einstellen

Absorbanz:

• Wellenlänge(n) wählen (z.B. 450 nm für ELISA)
• Referenz-Wellenlänge optional (z.B. 620 nm)

Fluoreszenz:

• Anregungs-Wellenlänge (Ex)
• Emissions-Wellenlänge (Em)
• Gain/Verstärkung anpassen

Lumineszenz:

• Integrationszeit festlegen
• Delay-Zeit wenn nötig

3. Plattenlayout definieren

• Wells markieren: Proben, Standards, Blanks, Kontrollen
• Verdünnungsreihen können automatisch berechnet werden
• Replikate festlegen

Messung durchführen

1. Platte einsetzen

• Platte vorsichtig in Träger einsetzen
• Position A1 beachten (meist links oben)
• Deckel schließen

2. Messung starten

• "Start" in Software klicken
• Nicht das Gerät öffnen während der Messung!
• Messzeit je nach Protokoll: 30 Sekunden bis mehrere Minuten

3. Kinetische Messungen

• Für zeitabhängige Messungen (z.B. Enzym-Assays)
• Intervall und Gesamtdauer festlegen
• Temperatur konstant halten

Datenauswertung

1. Rohdaten prüfen

• Heatmap-Ansicht für schnelle Qualitätskontrolle
• Ausreißer identifizieren
• Blank-Werte kontrollieren

2. Berechnungen

• Blank-Subtraktion
• Standardkurve erstellen (bei quantitativen Assays)
• Konzentrations-Berechnungen

3. Export

• Daten als Excel-Datei exportieren
• Grafiken als Bilder speichern
• Protokoll für Reproduzierbarkeit sichern

Wichtige Tipps

Vor der Messung

• ✅ Platte auf Raumtemperatur bringen
• ✅ Kondensation vermeiden
• ✅ Pipettierfehler minimieren
• ✅ Positive/negative Kontrollen einplanen

Während der Messung

• ❌ Gerät nicht öffnen
• ❌ Vibration vermeiden
• ❌ Direkte Beleuchtung vermeiden (bei Fluoreszenz)

Nach der Messung

• ✅ Daten sofort sichern
• ✅ Protokoll dokumentieren
• ✅ Bei Problemen: Messung wiederholen

Häufige Anwendungen

Assay-Typ	Modus	Typische Wellenlängen	Plattentyp
ELISA	Absorbanz	450 nm (+ 620 nm Ref)	Klar
MTT/XTT	Absorbanz	570 nm (+ 630 nm Ref)	Klar
FITC/GFP	Fluoreszenz	Ex: 485 nm, Em: 520 nm	Schwarz
Cy5	Fluoreszenz	Ex: 640 nm, Em: 680 nm	Schwarz
ATP-Assay	Lumineszenz	-	Weiß

Wartung & Sicherheit

Routinepflege

• Gerät sauber halten
• Plattenträger regelmäßig reinigen
• Filter/Lampen-Status überwachen

Sicherheit

• ⚠️ UV-Licht: Schutzbrille bei UV-Anwendungen
• ⚠️ Laserklasse beachten
• ⚠️ Elektrische Sicherheit: Kein Wasser auf Gerät

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⚠️ WICHTIG: Diese Anleitung ersetzt NICHT das offizielle Handbuch! Für spezifische Protokolle, Fehlerbehebung und erweiterte Funktionen immer das Herstellerhandbuch konsultieren. Das Handbuch findest du im Labor oder unter folgendem Link: https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LCD/manuals/D01523~.pdf