Fibronectin-Binding Assay

Materials
	humanes Serum (500µl/Probe)
	gekoppelte Latex Beads
	α-Fn Antikörper (HFN7.1)
	Zweitantikörper (α-MCy2)

Durchführung

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Von den zu untersuchenden Beads werden 30-60µl mit 500µl humanem Serum gemischt und 2h bei RT auf dem Rotator inkubiert. Anschliessend werden die Proben zweimal mit PBS gewaschen und mit □-Fn Antikörper versetzt (Zellkulturüberstand unverdünnt). Die Inkubation mit Erstantikörper erfolgt für 1h bei RT auf dem Rotator. Die Proben werden anschliessend wieder zweimal mit PBS gewaschen und mit Zweitantikörper versetzt (1:200). Für die Inkubation werden die Eppis mit Aluminiumfolie abgedunkelt und 1h bei RT auf dem Rotator inkubiert. Danach werden die Proben zweimal mit PBS gewaschen und in FACS-Puffer aufgenommen. Die Messung erfolgt am LSRII.