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<p>Created page with &quot;&lt;noinclude&gt; == Vorlage für Klonierungsprojekte == Diese Seite dient als Vorlage für neue gentechnische Arbeiten im Labor (z. B. PCR-Klonierungen). Kopiere den folgenden Inhalt in eine neue Wiki-Seite und passe ihn projektbezogen an. &#039;&#039;&#039;Hinweis:&#039;&#039;&#039; Alle Datumsangaben, Enzyme, Vektoren etc. bitte entsprechend aktualisieren.&lt;/noinclude&gt; == Projekttitel == &#039;&#039;(z. B. Klonierung von GFP-tagged PAK1 in pcDNA3.1)&#039;&#039; * Startdatum: __.__.20__ * Bearbeiter: Benutzer:DeinN...&quot;</p> <p><b>New page</b></p><div>&lt;noinclude&gt;<br /> <br /> == Vorlage für Klonierungsprojekte ==<br /> Diese Seite dient als Vorlage für neue gentechnische Arbeiten im Labor (z. B. PCR-Klonierungen). Kopiere den folgenden Inhalt in eine neue Wiki-Seite und passe ihn projektbezogen an.<br /> <br /> &#039;&#039;&#039;Hinweis:&#039;&#039;&#039; Alle Datumsangaben, Enzyme, Vektoren etc. bitte entsprechend aktualisieren.&lt;/noinclude&gt;<br /> <br /> == Projekttitel ==<br /> &#039;&#039;(z. B. Klonierung von GFP-tagged PAK1 in pcDNA3.1)&#039;&#039;<br /> <br /> * Startdatum: __.__.20__<br /> * Bearbeiter: [[Benutzer:DeinName]]<br /> <br /> == Zielstellung ==<br /> Kurze Beschreibung, was mit dieser Klonierung erreicht werden soll.<br /> <br /> * z. B.: Herstellung eines Expressionsvektors für transfizierbare GFP-PAK1-Konstrukte in HEK293T-Zellen.<br /> <br /> == Genutzte Materialien ==<br /> <br /> * **Vektor**: Name, Herkunft, Kartennummer<br /> * **Insert**: Quelle (z. B. cDNA, PCR), Primer<br /> * **Enzyme**: Name, Anbieter, Katalognummer<br /> * **Bakterienstamm**: z. B. E. coli NovaBlue<br /> * **Zelllinie für spätere Transfektion**: (falls relevant)<br /> <br /> == Experimenteller Ablauf ==<br /> <br /> === Tag 1 – PCR &amp; DpnI-Verdau ===<br /> <br /> # PCR mit Insert-Template<br /> # Kontrolle auf Agarosegel<br /> # DpnI-Verdau (1 h, 37 °C)<br /> # Reinigung mit PCR-Cleanup Kit<br /> <br /> === Tag 2 – Restriktion &amp; Gel-Extraktion ===<br /> <br /> # Restriktionsverdau Insert &amp; Vektor<br /> # Kontrollansätze: Vektor-only, no enzyme<br /> # Agarosegel &amp; Bild<br /> # Banden ausschneiden, Gelreinigung<br /> <br /> === Tag 3 – Ligation &amp; Transformation ===<br /> <br /> # Insert + Vektor ligieren (~5:1), o/n bei 4 °C<br /> # Transformation in NovaBlue<br /> # Ausplattieren auf selektiven Medien<br /> <br /> === Tag 4 – Klon-Selektion &amp; Miniprep ===<br /> <br /> # Kolonien picken, „Cake-style“ streaking<br /> # Miniprep aus 10–20 Klonen<br /> # Größenkontrolle auf Gel, ggf. Restriktionskontrolle<br /> <br /> === Tag 5 – Sequenzierung ===<br /> <br /> # Auswahl positiver Klone<br /> # Sequenzierung beauftragen (Dateiname, Anbieter)<br /> <br /> == Ergebnisse ==<br /> <br /> === Agarose-Gelbilder ===<br /> <br /> * Gel 1 (PCR)<br /> * Gel 2 (Verdau)<br /> * Gel 3 (Miniprep)<br /> <br /> === Sequenzanalyse ===<br /> <br /> * Ergebnisdateien (z. B. PDF-Link, Screenshot)<br /> * Kommentar: Sequenz korrekt? Leserahmen, Mutation?<br /> <br /> == Plasmidlagerung ==<br /> <br /> * Minipreps: Datum, Konzentration, Lagerort<br /> * Glycerinstocks: ID, -80 °C Freezer-Box, Etikettierung<br /> <br /> == Kommentare / Probleme ==<br /> &#039;&#039;z. B. geringe Klonausbeute, unerwartete Bandengröße, neue Primer nötig etc.&#039;&#039;&lt;noinclude&gt;<br /> [[Kategorie:Vorlagen|Klonierungsprojekt]]&lt;/noinclude&gt;</div>

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